形态特性聚团生长特性悬浮特征特性NK-92细胞是从一位患有急进性非霍奇金淋巴瘤的50岁白人男性外周血单核细胞衍生来的一株IL-2依赖型NK细胞株。NK-92MI细胞是转染得到的源自NK-92细胞的IL-2非依赖的NK细胞株。亲本细胞NK-92通过微粒体基因转化法用逆转录病毒MFG-hIL-2载体携带的人IL-2cDNA进行转化。可能由于载体整合到基因组DNA中，转化是稳定的。这株细胞对很多恶性细胞有细胞毒性；铬释放试验显示它能杀死K562细胞和Daudi细胞。NK-92细胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面标记阳性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面标记阴性。其亲本IL-2依赖的细胞株NK-92细胞及另一株同样来源于NK-92细胞株的IL-2非依赖的细胞株NK-92CI都可从ATCC得到。NK-92MI细胞和NK-92CI细胞这两个变种都包含、表达并合成hIL-2cDNA。NK-92MI细胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而亲本细胞不合成表达。1998年9月提交到ATCC的培养物污染了支原体，其后代通过BM细胞周期蛋白处理21天消除支原体。处理后6周，用Hoechst染色、PCR和标准培养测试进行支原体检测，结果都呈阴性。培养条件MEMα＋0.2mM Inositol＋0.1mM β-mercaptoethanol＋0.02mM Folic Acid＋12.5% HS＋12.5% FBS传代方法1:2冻存条件无血清冻存液

常温细胞收货后处理方法

1. 收到细胞后，首先观察培养瓶是否完好，若发现培养瓶有破裂，培养基外溢、浑浊等现象，请及时拍照并与我们联系。

2. 用75%酒精对培养瓶表面进行消毒处理，将培养瓶置于细胞培养箱中静置培养2~4 h，以恢复细胞状态。

3. 静置完成后，取出培养瓶，显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40×,100×,200×各一张）前三天照片为重要售后依据。如发现细胞异常请及时与我们联系，如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。

4. 若细胞密度超过80%，则可以根据提供的细胞培养步骤进行传代或冻存；若细胞密度未达到80%，收集瓶中完quan培养基，留6mL培养基，放入细胞培养箱中继续培养。

冻存细胞收货后处理方法

1. 收到细胞后，首先观察泡沫箱中干冰是否有剩余，冻存管是否完好，是否有解冻情况，若发现干冰完quan汽化或冻存管有解冻现象，请及时拍照并与我们联系。如果细胞签收三天内未与我们联系，则默认为收货良好。

2. 复苏第一管如有活性、状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第 二管。

特别说明：未与我方联系，擅自复苏第二管出现问题不予售后。

细胞培养步骤

1. 复苏细胞：从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞，水浴锅提前打开预热37℃。

1) 将查找到的冻存细胞在37℃水浴中迅速摇晃解冻；

2) 将冻存管中的细胞移至含 5ml 完quan培养基的离心管中，1000rpm 离心 5min；

3) 弃去上清液，补加4-6mL完quan培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中（或6cm皿中），培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

2. 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1) 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次；

2) 加1-2mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化3-5min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加5ml以上含10%血清的完quan培养基终止消化；

3) 轻轻吹打细胞，完quan脱落后吸出至离心管中，1000rpm离心5-8min，弃去上清液，补加1-2mL完quan培养基后吹匀；

4) 按5-6mL/瓶补加完quan培养基，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含5-6 mL完quan培养基的培养皿中或者培养瓶中。

（即1个T25传代接种至2~3个T25或者2~3个直径为6cm的培养皿）

3. 细胞冻存：细胞收集参照传代步骤1~2，按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜，后续可转入液氮罐中长期保存。

关于细胞株售后服务

一、细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2、3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

二、细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。