ATCC细胞株的配制

　　(1)称量和熬煮

　　按细胞株配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。

　　(2)加热溶解

　　把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂*溶解后，再补充水分至所需量。

　　(3)分装

　　按实训要求，将配制的细胞株分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使细胞株沾在管口或瓶口上造成污染。

　　分装量：ATCC细胞株约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体细胞株以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

　　(4)加棉塞

　　细胞株分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入细胞株内造成污染，并保证有良好的通气性能。

　　(5)包扎

　　加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明细胞株名称、组别、配制日期。

　　ATCC细胞株配制注意事项

　　1.细胞株经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。

　　2.ATCC细胞株一般不需要调pH。对于要调节pH的细胞株，一般用pH试纸测定其pH。如果细胞株偏酸或偏碱时，可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏细胞株成分。

　　3.细胞株在使用时也可以做成不含琼脂的液体细胞株，用于菌类的震荡培养。

　　4.ATCC细胞株也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.2g/L细胞株，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。